2 × HotStart Taq PCR -blanding

Dette produktet inneholder HotStart Taq DNA -polymerase, dNTP, MgCl2, reaksjonsbuffer, PCR -enhancer, optimizer og stabilisator, med en konsentrasjon på 2 ×. Den har fordelene med rask forsterkningshastighet, enkelhet, høy følsomhet, sterk spesifisitet, god stabilitet og lignende, og kan redusere driftsfeil i størst grad. Den er egnet for svært spesifikke PCR-reaksjoner, og forsterkning av komplekse maler som høyt GC-innhold (> 60%) eller maler med sekundære strukturer, samt storskala genpåvisning, etc.

Katt. Nei Pakkestørrelse
4992321 1 ml
4992322 5 x 1 ml
4992316 5 × 1 ml

Produkt detalj

FAQ

Produktetiketter

Produkthøydepunkt

Ett rør Taq MasterMix (nasjonal høyteknologisk produktsertifisering)

■ 2 × HotStart Taq PCR MasterMix har forbedret spesifisitet og følsomhet for PCR -reaksjon og kan forsterke komplekse maler med høyt GC -innhold, sekundær struktur og lignende. Så lite som 2 kopier av målmalen kan forsterkes, noe som sikrer mer nøyaktige eksperimentelle resultater.

■ Den unike HotStart Taq MasterMix-formelen gjør hele reaksjonssystemet veldig stabilt, og aktiviteten vil ikke bli påvirket av gjentatt fryse-tining eller langtidslagring ved 4 ℃.

■ Den stabile og effektive forhåndsforberedte PCR-blandede løsningen kan gjøre operasjonen rask og enkel, og reduserer arbeidsintensiteten og prøvetakingsfeilen sterkt. Høytytende PCR-forsterker og optimizer er også inkludert i blandingen, noe som reduserer kravene til PCR-forhold.

■ Dette produktet har både fargestoffholdige og fargestofffrie systemer. Fargestoffholdige MasterMix-produkter kan elektroforeseres direkte etter PCR, uten å legge til lastebuffer.

Alle produktene kan tilpasses for ODM/OEM. For detaljer,vennligst klikk på Tilpasset service (ODM/OEM)


  • Tidligere:
  • Neste:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Spørsmål: Ingen forsterkningsbånd

    A-1 mal

    ■ Malen inneholder proteinforurensninger eller Taq -hemmere, etc. —— Rens DNA -malen, fjern proteinforurensninger eller ekstraher mal -DNA med rensingssett.

    ■ Denatureringen av malen er ikke fullført —— Øk denatureringstemperaturen passende og forleng denatureringstiden.

    ■ Nedbrytning av maler —— Klargjør malen på nytt.

    A-2 Primer

    ■ Dårlig kvalitet på primere —— Syntetiser primeren på nytt.

    ■ Nedbrytning av primer —— Del væskene med høy konsentrasjon i lite volum for konservering. Unngå å fryse og tine flere ganger eller ved langvarig 4 ° C kryokonservering.

    ■ Ukorrekt utforming av primere (f.eks. Primerlengde ikke tilstrekkelig, dimer dannet mellom primere, etc.) -Resign primere (unngå dannelse av primer dimer og sekundær struktur)

    A-3 mg2+konsentrasjon

    ■ Mg2+ konsentrasjonen er for lav —— Riktig økning av Mg2+ konsentrasjon: Optimaliser Mg2+ konsentrasjon ved en rekke reaksjoner fra 1 mM til 3 mM med et intervall på 0,5 mM for å bestemme den optimale Mg2+ konsentrasjon for hver mal og primer.

    A-4 Utglødningstemperatur

    ■ Den høye glødetemperaturen påvirker bindingen av primer og mal. —— Reduser glødetemperaturen og optimaliser tilstanden med en gradient på 2 ° C.

    A-5 Forlengelsestid

    ■ Kort forlengelsestid —— Øk forlengelsestiden.

    Spørsmål: Falske positivt

    Fenomener: Negative prøver viser også målsekvensbåndene.

    A-1 Forurensning av PCR

    ■ Kryssforurensning av målsekvens eller forsterkningsprodukter —— Forsiktig å ikke pipette prøven som inneholder målsekvensen i den negative prøven eller søl dem ut av sentrifugerøret. Reagensene eller utstyret bør autoklaveres for å eliminere eksisterende nukleinsyrer, og forekomsten av forurensning bør bestemmes gjennom negative kontrollforsøk.

    ■ Reagensforurensning —— Alikvoter reagensene og oppbevar ved lav temperatur.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ konsentrasjonen er for lav —— Riktig økning av Mg2+ konsentrasjon: Optimaliser Mg2+ konsentrasjon ved en rekke reaksjoner fra 1 mM til 3 mM med et intervall på 0,5 mM for å bestemme den optimale Mg2+ konsentrasjon for hver mal og primer.

    ■ Feil primerutforming, og målsekvensen har homologi med ikke-målsekvensen. —— Re-design primere.

    Spørsmål: Ikke-spesifikk forsterkning

    Fenomener: PCR-forsterkningsbåndene er uforenlige med den forventede størrelsen, enten store eller små, eller noen ganger oppstår både spesifikke forsterkningsbånd og uspesifikke forsterkningsbånd.

    A-1 Primer

    ■ Dårlig primerspesifisitet

    —— Re-design primer.

    ■ Grunnkonsentrasjonen er for høy —— Øk denatureringstemperaturen riktig og forleng denatureringstiden.

    A-2 mg2+ konsentrasjon

    ■ Mg2+ konsentrasjonen er for høy —— Reduser Mg2+ -konsentrasjonen riktig: Optimaliser Mg2+ konsentrasjon ved en rekke reaksjoner fra 1 mM til 3 mM med et intervall på 0,5 mM for å bestemme den optimale Mg2+ konsentrasjon for hver mal og primer.

    A-3 termostabil polymerase

    ■ Overdreven enzymmengde —— Reduser enzymmengden på passende måte med intervaller på 0,5 U.

    A-4 Utglødningstemperatur

    ■ Glødningstemperaturen er for lav —— Øk glødetemperaturen på riktig måte, eller bruk to-trinns glødemetode

    A-5 PCR-sykluser

    ■ For mange PCR -sykluser —— Reduser antallet PCR -sykluser.

    Spørsmål: Ujevne eller flekker

    A-1 Primer——Dårlig spesifisitet ——Resign primeren, endre posisjonen og lengden på primeren for å forbedre dens spesifisitet; eller utføre nestet PCR.

    A-2 Mal-DNA

    ——Malen er ikke ren —— Rens malen eller ekstraher DNA med rensesett.

    A-3 mg2+ konsentrasjon

    ——Mg2+ konsentrasjonen er for høy —— Reduser Mg riktig2+ konsentrasjon: Optimaliser Mg2+ konsentrasjon ved en rekke reaksjoner fra 1 mM til 3 mM med et intervall på 0,5 mM for å bestemme den optimale Mg2+ konsentrasjon for hver mal og primer.

    A-4 dNTP

    —— Konsentrasjonen av dNTP er for høy —— Reduser konsentrasjonen av dNTP på riktig måte

    A-5 Utglødningstemperatur

    —— For lav glødetemperatur —— Øk glødetemperaturen passende

    A-6 sykluser

    —— For mange sykluser —— Optimaliser syklusnummeret

    Spørsmål: Hvor mye mal -DNA skal tilsettes i et 50 ul PCR -reaksjonssystem?
    ytry
    Spørsmål: Hvordan forsterke lange fragmenter?

    Det første trinnet er å velge riktig polymerase. Vanlig Taq-polymerase kan ikke korrekturleses på grunn av mangel på 3'-5 'eksonukleaseaktivitet, og mismatch vil i stor grad redusere forlengelseseffektiviteten til fragmenter. Derfor kan vanlig Taq -polymerase ikke effektivt amplifisere målfragmenter større enn 5 kb. Taq -polymerase med spesiell modifikasjon eller annen high fidelity -polymerase bør velges for å forbedre forlengelseseffektiviteten og dekke behovene til lang fragmentforsterkning. I tillegg krever forsterkningen av lange fragmenter også tilsvarende justering av primerdesign, denatureringstid, forlengelsestid, buffer-pH, etc. Vanligvis kan primere med 18-24 bp føre til bedre utbytte. For å forhindre malskade, bør denatureringstiden ved 94 ° C reduseres til 30 sekunder eller mindre per syklus, og tiden for å stige temperaturen til 94 ° C før forsterkning bør være mindre enn 1 min. Videre kan innstilling av forlengelsestemperaturen til omtrent 68 ° C og utforming av forlengelsestiden i henhold til hastigheten på 1 kb/min sikre effektiv forsterkning av lange fragmenter.

    Spørsmål: Hvordan forbedre amplifikasjonstroheten til PCR?

    Feilraten for PCR -forsterkning kan reduseres ved å bruke forskjellige DNA -polymeraser med høy kvalitet. Blant alle Taq DNA -polymerasene som er funnet så langt, har Pfu -enzymet den laveste feilraten og den høyeste troverdigheten (se vedlagte tabell). I tillegg til enzymvalg kan forskere ytterligere redusere PCR -mutasjonshastigheten ved å optimalisere reaksjonsbetingelsene, inkludert optimalisering av buffersammensetning, konsentrasjon av termostabil polymerase og optimalisering av PCR -syklusnummer.

    Skriv meldingen din her og send den til oss